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外泌体分离和纯化试剂盒

简要描述:外泌体膜含有分泌细胞来源蛋白质和脂质,其中,磷脂酰s氨酸(PS),目前普遍认为在活细胞中通过脂质翻转酶的作用定位于细胞膜内侧,但是,它也暴露在外泌体膜的外侧3)。Tim4(T-cell immunoglobulin domain and mucin domain-containing protein 4)是凋亡细胞的巨噬细胞吞噬受体。在钙离子存在下,Tim4通过与胞外区的IgV结构域结合到PS 4

基础信息

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厂商性质

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更新时间

2025-11-09

浏览次数

79
详细介绍
品牌其他品牌供货周期一个月

使用磷脂酰si氨酸和Tim4的新型外泌体纯化法:PS亲和法


外泌体膜含有分泌细胞来源蛋白质和脂质,其中,磷脂酰si氨酸(PS),目前普遍认为在活细胞中通过脂质翻转酶的作用定位于细胞膜内侧,但是,它也暴露在外泌体膜的外侧3)。Tim4(T-cell immunoglobulin domain and mucin domain-containing protein 4)是凋亡细胞的巨噬细胞吞噬受体。在钙离子存在下,Tim4通过与胞外区的IgV结构域结合到PS 4

以上述知识作为参考,我们利用Tim4固化磁珠,在钙离子存在下捕获培养上清和血清等样品中的外泌体,并通过添加螯合剂即可纯化外泌体,这种划时代的外泌体纯化方法是由FUJIFILM Wako和金泽大学纳米生命科学研究所的华山教授共同开发并取得了成功5)

与传统的外泌体纯化法相比,外泌体纯化试剂盒“MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2"可实现更加简单地纯化完整状态的高纯度外泌体。这是可取代迄今为止的黄金标准法超速离心法的新型外泌体纯化法。


外泌体分离和纯化试剂盒


利用磷脂酰si氨酸(PS)结合分子以金属离子依赖性方式捕获细胞外囊泡,并通过螯合剂洗脱。



利用PS亲和法提取和分离细胞外囊泡(外泌体)


采用新型亲和纯化法


● 使用PS亲和分子回收

● 低背景

● 在中性条件下利用螯合剂温和洗脱


外泌体分离和纯化试剂盒


分离高纯度完整的外泌体

无需进行超速离心


● 使用磁珠提高操作性

● 优化实验protocol


外泌体分离和纯化试剂盒


实验再现性高


外泌体分离和纯化试剂盒


和其他纯化方法的比较


方法

纯度

外泌体回收量

获得完整粒子

总蛋白量

MagCapture™(PS亲和法)

■ ■ ■ ■

■ ■ ■

超速离心法

■ ■

■ ■

■ ■ ■

聚合物沉淀法

■ ■

■ ■ ■ ■

密度梯度离心法

■ ■ ■

■ ■

尺寸排阻法

■ ■ ■

■ ■

■ ■

表面抗原亲和法 (使用抗体)

■ ■ ■

■ ■

×

No data


※ 本表格根据FUJIFILM Wako自行调查的结果制成。表中结果可能因样品、检测对象与方法的不同而有所差异,无法保证以上各方法的性能。



MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2


MagCapture™ 外泌体提取试剂盒PS Ver.2:PS亲和法x磁珠


该试剂盒可从细胞培养上清、血清、血浆等样品中高纯度且简便快捷地纯化外泌体等细胞外囊泡。通过应用以钙离子依赖方式与细胞外囊泡表面的磷脂酰si氨酸(PS)结合的Tim4,并使用螯合剂实现完整的细胞外囊泡纯化。



特点


● 通过新型亲和法(PS亲和法)可获得高纯度的细胞外囊泡

● 与传统的超速离心法相比,可获得更高回收量和纯度的外泌体

● 可获得完整的外泌体,应用广泛

● 磁珠操作简便,可处理多个样品

 


操作流程


外泌体分离和纯化试剂盒



试剂盒组成



2 tests

10tests

  Biotin Capture Magnetic Beads

120 μL

600 μL

  Biotin-labeled Exosome Capture

20 μL

100 μL

  Exosome Immobilizing / Washing Buffer (10×)

5 mL

25 mL

  Exosome Binding Enhancer (500×)

300 μL

1500 μL

  Exosome Elution Buffer (10×)

300 μL

1500 μL

  Reaction Tubes

4支

22支



PS亲和法提取纯化外泌体的应用数据合集


使用PS亲和法提取和纯化外泌体的性能数据。


1. 从培养上清样品纯化的细胞外囊泡性能数据

2. 从血清、血浆、尿液样品纯化的细胞外囊泡性能数据

3. 与传统沉淀法的性能比较

4. 健康人血清来源外泌体的miRNA和mRNA的回收量比较

5. 外泌体的蛋白质组学分析

6. 使用Protein Assay BCA Kit定量外泌体的蛋白浓度

7. 外泌体的标记和Hela细胞导入实验



1. 从培养上清样品纯化的细胞外囊泡的性能数据

使用透射电子显微镜对PS亲和法和超速离心法分离的外泌体进行分析。


外泌体分离和纯化试剂盒

①本试剂盒纯化的样品

样品:COLO201细胞培养上清10 mL

粒子数:3.69×1010 particles/mL

 

②超速离心法纯化的样品

样品:COLO201细胞培养上清10 mL

粒子数:1.68×1010 particles/mL

与超速离心法相比,PS亲和法分离的外泌体可观察到多约100 nm的囊泡,且杂质少。

 


2. 从血清、血浆、尿液样品纯化的细胞外囊泡的性能数据


从人血清提取的外泌体回收量比较

使用本试剂盒、超速离心法和表面抗原抗体亲和法从1 mL的人血清样品中提取外泌体,并进行Western blot(抗CD9抗体和抗CD63 抗体)。


外泌体分离和纯化试剂盒

泳道1:超速离心法

泳道2:PS亲和法

泳道3:A公司外泌体提取试剂盒(CD9)

泳道4:A公司外泌体提取试剂盒(CD63)

泳道5:A公司外泌体提取试剂盒(CD81)

泳道6:A公司外泌体提取试剂盒(CD9、CD63、CD81和EpCAM抗体磁珠混合物)


WB数据:每个样本结果对应150 μL的血清样品。从100 μL提取物中取出15 μL,添加5μL的 4×SDS样品缓冲液,全部上样。

 

结果:与超速离心法和抗体亲和法相比,PS亲和法的外泌体回收率更高。

 


从人EDTA血浆样品中分离外泌体


分别从1mL的EDTA血浆、EDTA血浆(超滤更换缓冲液)、人血清中样品中提取外泌体,并进行Western blot (抗 Flotillin2 抗体)。


外泌体分离和纯化试剂盒

泳道1:EDTA血浆

泳道2:EDTA血浆(超滤更换缓冲液)

泳道3:血清


检测抗体抗Flotillin-2小鼠单抗(29/Fotillin-2),BD Bioscience


使用样品量各1mL


WB数据每个样本结果对应150 μL血清样品。从100 μL提取物中取出15 μL,添加5μL的4×SDS样品缓冲液,全部上样。


结果:通过超滤更换缓冲液后,可以更高效地回收外泌体。




从人尿液样品中分离的外泌体回收量比较


使用本试剂盒、聚合物沉淀法和超速离心法从1 mL尿液样品中提取外泌体,并进行Western blot。


标记蛋白回收量比较

外泌体分离和纯化试剂盒

泳道1:聚合物沉淀法

泳道2:超速离心法

泳道3:PS亲和法

 

检测抗体抗 CD9 兔多抗(System Biosciences)


使用样品量各1mL


WB数据:每个样本结果对应150 μL尿液样品。从100 μL提取物中取出15 μL,添加5μL的 4×SDS 样品缓冲液,全部上样。



粒径比较

外泌体分离和纯化试剂盒

外泌体分离和纯化试剂盒

外泌体分离和纯化试剂盒

Size Distribution

Mean: 176 +/- 1.6 nm
Mode: 117 +/- 4.5 nm
SD: 96 +/- 5.8 nm

Size Distribution

Mean: 191 +/- 9.4 nm
Mode: 113 +/- 2.8 nm
SD: 88 +/- 7.4 nm

Size Distribution

Mean: 107 +/- 1.2 nm
Mode: 86 +/- 1.2 nm
SD: 42 +/- 1.0 nm


结果:从尿液样品中也可以高纯度提取外泌体。



3. 与传统沉淀法的性能比较


分别用本试剂盒、超速离心法和聚合物沉淀法从K562(人慢性骨髓性白血病)细胞培养上清(无血清培养上清或 10% Exosome-depleted FBS 添加培养基)提取外泌体,比较三种方法的外泌体回收量和外泌体纯度。

 

PS 亲和法:按照试剂盒的Protocol(反应时间:3 h),从1 mL经离心处理(10,000×g,30 min)的 K562 细胞培养上清(无血清培养基或 10% Exosome-depleted FBS 添加培养基)中提取外泌体。

 

超速离心法:将10 mL经过离心处理(10,000×g,30 min)的K562细胞培养上清(无血清培养基或 10% Exosome-depleted FBS 添加培养基)进行超离(110,000×g,70 min),用TBS缓冲液重悬沉淀物后,再进行超离(110,000×g,70 min),回收沉淀部分。

 

聚合物沉淀法:从1 mL经过离心处理(10,000×g,30 min)的 K562 细胞培养上清(无血清培养基或 10% Exosome-depleted FBS 添加培养基)中,按照市售的A公司产品的操作说明(静置时间:过夜)提取外泌体。

 


比较提取的外泌体的电子显微镜分析结果和纳米粒子追踪(NTA)分析结果


分别用本试剂盒、超速离心法和聚合物沉淀法从K562细胞培养上清提取外泌体,用NTA LM-10 检测外泌体的粒子直径。另外,用最终浓度为2%的多聚甲醛固定提取到的外泌体(2~4×1010 particles),使用电子显微镜进行分析。



外泌体分离和纯化试剂盒

电子显微镜图像 数据提供:金泽大学 医学系 华山教授、大阪大学 iFReC 中井先生



结果:MagCapture™(PS亲和法)可提取约100 nm 的粒子,在电子显微镜中也可以确认到大量的细胞外囊泡。



K562细胞培养上清(无血清培养基)提取的外泌体回收量和纯度的比较


使用本试剂盒、超速离心法和聚合物沉淀法从K562细胞培养上清(无血清培养基)提取外泌体并进行电泳,再使用银染色和 WB 法(抗CD63抗体、抗Flotilin-2抗体和抗Lamp-1 抗体)进行检测。


外泌体分离和纯化试剂盒


结果:银染色结果显示,与MagCapture™(PS亲和法)相比,超速离心法和聚合物沉淀法可提取更多外泌体。但是,WB法显示,只有MagCapture™ 外泌体提取试剂盒可检测外泌体标记蛋白条带。

由此可知,MagCapture™ 外泌体提取试剂盒可提取更高纯度的外泌体。



K562细胞培养上清(10% FBS添加培养基)提取外泌体的回收量和纯度的比较


使用本试剂盒 、超速离心法和聚合物沉淀法,从K562细胞培养上清(10%去外泌体FBS 添加培养基)提取样品进行电泳,再用银染法和WB法(抗CD63抗体、抗Flotilin-2抗体和抗Lamp-1 抗体)进行检测。同时,对外泌体提取片段进行质谱分析,比较所有分析的多肽中K562细胞来源的人多肽的比例(添加至培养基的FBS来源牛蛋白聚集体混入,会导致人来源多肽比例下降)。


外泌体分离和纯化试剂盒

质谱分析 数据提供:金泽大学 医学系 华山教授、大阪大学 iFReC 中井先生


结果:使用MagCapture™(PS亲和法)可从FBS培养基中提取高纯度外泌体,因此在低背景时也可进行质谱检测。



4. 健康人血清来源外泌体的miRNA和mRNA的回收量比较


比较从不同方法制备的外泌体中microRNA和mRNA的回收量


使用超离法和PS亲和法从健康人血清中分离外泌体后,再使用microRNA 提取试剂盒(产品编号295-71701)提取RNA。通过定量PCR法比较microRNA量(let-7a, miR-16, miR-92a, miR-142-3p)和mRNA量(GAPDH, PIK3CB)的Ct 值。


外泌体分离和纯化试剂盒


结果:与超离法相比,PS亲和法提取外泌体中的microRNA和mRNA的效率更高。



PS亲和法的RNA提取方法比较


使用PS亲和法从健康人血清中分离外泌体,再使用 microRNA 提取试剂盒(产品编号295-71701)或使用AGPC 法提取RNA。通过定量PCR法比较microRNA量(let-7a, miR-16, miR-92a, miR-142-3p)和mRNA量(GAPDH, PIK3CB)的Ct值。


外泌体分离和纯化试剂盒


结果:与AGPC法相比,使用microRNA提取试剂盒提取外泌体中的microRNA和mRNA的效率更高。




5. 外泌体的蛋白质组学分析


实验内容和结果


分别使用PS亲和法、超离法和聚合物沉淀法,从K562细胞培养上清(添加10%去外泌体FBS的培养基)中纯化外泌体。纯化的样品通过 10% SDS-PAGE电泳分离,切下全部蛋白条带。然后进行胶内消化,用液相色谱质谱(LC-MS)鉴定蛋白。比较上述三种方法纯化的外泌 体(n=3)中检测蛋白的成对相关性。



鉴定的蛋白含量qian10的蛋白


白色柱:外泌体来源人蛋白

灰色柱:牛血清来源牛蛋白

红 色:外泌体标记蛋白

样品:K562 细胞培养上清(10%已去除外泌体的培养基)



PS亲和法

超离心

聚合物沉淀法

1

71 kDa热休克同源蛋白

(Heat shock   cognate 71kDa protein)

DNA依赖蛋白激酶催化亚基基因

(DNA-dependent protein kinase catalytic   subunit)

补体C3

(Complement C3)

2

膜联蛋白A6

(Annexin A6)

铁转蛋白受体1

(Transferrin receptor protein1)

α2-巨球蛋

(Alpha-2-macroglobulin)

3

铁转蛋白受体1

(Transferrin   receptor protein1)

血清白蛋白

(Serum albumin)

纤连蛋白

(Fibronectin)

4

V-ATP酶A亚基

(V-type   proton ATpase catalytic subunit A)

ATP依赖RNA解旋酶

(ATP-dependent RNA helicase A)

血清白蛋白

(Serum albumin)

5

浮舰蛋白-2

(Flotillin-2)

微管蛋白β5

(Tubulin beta-5 chain)

血小板反应蛋白-1

(Thrombospondin-1)

6

程序性细胞死亡6互作蛋白

(Programmed cell death 6-interacting   protein)

71 kDa热休克同源蛋白

(Heat shock   cognate 71 kDa protein)

补体C4

(Complement C4)

7

细胞表面抗原4F2重链

(4F2   cell-surface antigen heavy chain )

脂肪酸合成酶

(Fatty acid synthase)

α-1抗蛋白酶

(Alpha-1-antiproteinase)

8

膜联蛋白A1

(Annexin A1)

细胞表面抗原4F2重链

(4F2 cell-surface antigen heavy chain)

载脂蛋白-β-100

(Apolipoprotein-β-100)

9

220kDa激酶D相互作用底物

(Kinase D-interacting substrate of 220kDa)

U5小核核糖核蛋白的解旋酶

(U5 small nuclear ribonucleoprotein helicase)

胎儿血红蛋白亚单位

(Hemoglobin fetal subunit beta)

10

膜联蛋白A2

(Annexin A2)

β4微管蛋白

(Tubulin beta-4B chain)

β5微管蛋白

(Tubulin beta-5 chain)


结果:聚合物沉淀法中混入了牛血清来源蛋白,与之相比,PS亲和法检测出了更多的标记蛋白。



成对相关性比较


外泌体分离和纯化试剂盒

样品:K562细胞培养上清(10% 去外泌体FBS培养基)


外泌体分离和纯化试剂盒


参考文献:Sci Rep. 2016 Sep 23;6:33935. Nakai W et al.


同种方法的相关性:PS亲和法和聚合物法较高,超离法稍低,

不同方法的相关性:较低,各种提取方法获得的外泌体亚群可能不同。



6. 使用Protein Assay BCA Kit定量外泌体的蛋白浓度


Protein Assay BCA Kit 是使用二辛可宁酸(BCA)定量检测溶液中蛋白质浓度的试剂盒,是蛋白质定量检测法中常用的方法。其原理为,碱性条件下的蛋白质Cu2+ 离子被还原为Cu+。Cu+与BCA形成络合物,产生紫色螯合物,紫色螯合物颜色与蛋白质浓度相关,因此通过测定562 nm 处的吸光度,并与标准曲线进行比较,即可定量溶液中的蛋白质浓度。

使用MagCapture™ 外泌体提取试剂盒(PS亲和法)从细胞培养上清中提取外泌体,并通过Protein Assay BCA Kit高灵敏检测外泌体中的蛋白质浓度。

 


实验内容及结果


将MagCapture™ 外泌体提取试剂盒(PS亲和法)提取的25 μL外泌体溶液分注于96孔板中,添加200 μL的Protein Assay BCA Kit 中试剂A和试剂B的混合液。然后60℃孵育30 min,检测560 nm 处的吸光度(图1)。结果表明,通过 Protein Assay BCA Kit 的高灵敏度检测,可检测纯化外泌体中的蛋白质浓度。


外泌体分离和纯化试剂盒



BCA Assay Protocol


外泌体蛋白质浓度非常低,因此BCA检测时无需稀释样品。

①将 BSA 标准溶液按照 250、125、62.5、31.25、15.625 μg/mL 和空白对照,分别每孔 25 μL添加至96 孔板中。

②分别把纯化的外泌体和洗脱缓冲液(空白)按照每孔 25 μL添加至96 孔板。

③将200 μL Protein Assay BCA Kit(产品编号:297-73101)的试剂A和试剂B混合液(AB=501)添加至孔板中。

④60℃孵育30 min。

⑤室温下冷却孔板。

⑥检测560 nm处的吸光度。



7. 外泌体的标记和Hela细胞摄入实验


实验概要


使用PKH67(Sigma)标记 MagCapture™ 外泌体提取试剂盒(PS亲和法)纯化的外泌体,确认是否可导入Hela 细胞。

 


PKH67标记外泌体


1. MagCapture™ 外泌体提取试剂盒(PS亲和法)纯化外泌体(实验当天从COLO201细胞培养上清中纯化外泌体)。

    ※ 在步骤6-7的凝胶过滤步骤中,为了减少标记样品的吸附损失,建议向试剂盒附带的洗脱液中添加EV-Save™ Extracellular Vesicle Blocking Reagent来制备样品。

2. 用BCA Assay和NanoSight检测样品的蛋白质浓度和粒子浓度。

3. 将外泌体样品溶液分装至1.5 mL管中。

    ※ 本次使用相当于3 μg蛋白量的外泌体,请制备标记所需的外泌体量。

4. 将2.0 μL的PKH linker 溶解在0.25 mL 的 DiluentC (PKH67试剂盒随附)中。…4×Dye solution

    ※ 请制备标记所需的使用量。

5. 添加1/3样品量的4×Dye solution至样品中,混合后在室温中孵育 5-10 min。

6. 根据随附的使用说明书用PBS平衡 Exosome Spin Columns (MW 3000)(Thermo :#4484449)。

7. 将100 μL样品分别添加至上述平衡后的旋转柱中,750×g离心2 min。

    ※ 旋转柱的最大添加量为100 μL,因此样品量超过100μL时请准备所需支数。

8. 将外泌体溶液添加至已经接种好Hela细胞的培养皿中,24 h后用显微镜观察并利用流式细胞仪进行分析。

    ※ 根据实验调节外泌体添加量


显微镜观察结果

流式细胞仪分析结果

外泌体分离和纯化试剂盒

外泌体分离和纯化试剂盒

图1. PKH67标记外泌体的摄入观察


关于使用MagCapture™ 外泌体提取试剂盒(PS亲和法)分离COLO201来源外泌体样品(总蛋白量3 μg,粒子数1×1010个),使用PKH67 Green Fluorescent Cell Linker Kit Sigma)进行标记后,可在荧光显微镜(左)和流式细胞仪(右)中确认到Hela细胞的摄入。


结果:在显微镜和流式细胞仪中都能可确认PKH67标记的外泌体通过胞吞作用被捕获。此外添加EV-Save™ Extracellular Vesicle Blocking Reagent的样品在去除Dye时,可极大减少凝胶过滤的吸附损失。

 


各样品的前处理Protocol


本流程是样品前处理的步骤。想提取外泌体和其他细胞外囊泡(微泡)时,请按照下述Protocol对样品进行 1,200×g 离心操作※1,如果要提取更高纯度的外泌体,则按照下述Protocol对样品进行10,000×g 离心操作※2


下文是细胞培养上清、血清/血浆的前处理方法。其他体液样品的前处理操作,请参考血清/血浆的Protocol,进行适当调整。


外泌体分离和纯化试剂盒


※1 提取外泌体+Large EVs时,请使用1,200xg上清作为纯化用样品。

※2 提取外泌体时,请使用10,000xg上清作为纯化用样品。

※3 提取Large EVs时,将10,000xg 离心所得的沉淀,用TBS重悬后作为样品。

※4 浓缩步骤是以大规模(~50 mL)的细胞培养上清作为纯化用样品,是选择性的操作步骤。但由于该步骤可提高回收效率,因此请尽可能进行该步骤。

※5 EV-Save™ 含有聚合物,因此不建议用作蛋白质组学分析的样品。



大量或少量样品时的注意点


大量样品

从大规模(~50 mL)的细胞培养上清中纯化外泌体时,推荐浓缩操作。因其可提高回收效率,,请尽可能进行该操作。


少量样品

样品体积低于0.5 mL时,使用旋转装置无法有效混匀Exosome Capture固化磁珠和样品,因此请根据需求添加TBS缓冲液,将样品体积扩增至0.5 mL以上。(例:100 〜200 μL → 500 μL)

 


参考数据:外泌体和Large EVs的NTA分析


准备了1 mL用莫能菌素钠促进外泌体分泌的K562细胞培养上清,并从中制备10,000 x g离心后的上清样品和10,000 x g沉淀样品(使用1 mL TBS重悬)。

再使用MagCapture™ 外泌体提取试剂盒从两个样品中纯化细胞外囊泡,并进行NanoSight LM10分析。


外泌体分离和纯化试剂盒



◆Ver.2和旧款的不同


MagCapture™ 外泌体提取试剂盒Ver.2(产品编号:290-84103)は、MagCapture™ 外泌体提取试剂盒(产品编号:293-77601,旧款)的改良版。


1. 外泌体回收效率提高

→相同操作下,可提取更多的外泌体!

2. 可大幅度缩短操作时间

→1 h即可完成和样品的亲和反应!(旧款需要3 h)

3. 改善细胞毒性

→降低洗脱缓冲液的细胞毒性


试剂盒

MagCapture™   外泌体提取试剂盒Ver.2

(旧款)MagCapture™ 外泌体提取试剂盒

外泌体提取性能

培养上清:■■■■

血液样品:■■■■

培养上清:■■■

血液样品:■■■

样品反应时间※1

1 h以上

3 h以上

磁珠可再利用次数※2

5次

5次

洗脱缓冲液的细胞毒性

※3

因细胞种类不同


※1 因样品体积而异。

※2 使用总次数设定为5次,包括第一次使用1次,重复使用4次。提取样品的来源不同,考虑污染风险时,推荐使用新调配的磁珠。

※3 请勿更换洗脱样品的缓冲液,可用于In VitroIn Vivo的给药实验。洗脱缓冲液的EDTA出现问题时,需要更换缓冲液。



旧款试剂盒和Ver.2试剂盒的性能比较


外泌体回收率的比较(血清和血浆)

外泌体回收率的比较(间充质干细胞(MSC)培养上清)

纯化外泌体的细胞毒性试验

 


1. 外泌体的回收率比较(血清和血浆)


使用MagCapture™外泌体提取试剂盒Ver.2(产品编号:290-84103)和旧款试剂盒从各种人血液样品中分离纯化外泌体(EV)。对获得的外泌体,

①使用PS Capture™外泌体ELISA试剂盒比较EV标志物

②通过Western blot比较EV标志物

③通过NTA进行粒子数测定

再将试剂盒附带的洗脱缓冲液按照常规的Protocol稀释成“1x Elution buffer(1xEB)",并和5倍稀释的“2xElution buffer(2xEB)"进行比较。

结果显示,Ver.2试剂盒表现出与旧款试剂盒相当或更优的性能。特别是使用2xElution Buffer时,血浆样品的回收效率显著提升。

 


①使用PS Capture™外泌体ELISA试剂盒比较EV标志物


外泌体分离和纯化试剂盒




②通过Western blot比较EV标志物


外泌体分离和纯化试剂盒

检测抗体:

抗CD9,大鼠单克隆抗体(77B)(产品编号: 019-28173)

抗CD63,单克隆抗体(3-13)(产品编号:012-27063)

抗Flotillin2,单克隆抗体(BD Biosciences)

 


③通过NTA进行粒子数测定


外泌体分离和纯化试剂盒



2. 外泌体回收率比较(间充质干细胞(MSC)培养上清)


使用MagCapture™外泌体提取试剂盒Ver.2(产品编号:290-84103)和旧款试剂盒从MSC培养上清中提取纯化外泌体(EV)。对获得的外泌体,

①使用PS Capture™外泌体ELISA试剂盒比较EV标志物

②通过Western blot比较EV标志物

③通过NTA进行粒子数测定

结果显示,旧款试剂盒相比Ver.2试剂盒回收效率更高。

 


①使用PS Capture™外泌体ELISA试剂盒比较EV标志物


外泌体分离和纯化试剂盒



②通过Western blot比较EV标志物

外泌体分离和纯化试剂盒



③通过NTA进行粒子数测定

外泌体分离和纯化试剂盒



3. 纯化外泌体的细胞毒性试验


分别使用旧款试剂盒和Ver.2试剂盒从COLO201细胞培养上清中分离和纯化EV,再将等量的洗脱样品和对照洗脱缓冲液添加至提前接种的人正常成纤维细胞中,48 h后检测细胞形态变化。

结果显示,旧款试剂盒在添加Elution buffer和纯化外泌体48 h后,出现了细胞死亡现象,而使用Ver.2试剂盒时未观察到显著的细胞死亡。Ver.2试剂盒改善了旧款试剂盒存在的细胞毒性问题,因此无需更换Elution buffer即可用于In VitroIn Vivo给药实验。

 若Elution buffer的EDTA出现问题时,需要更换缓冲液。


外泌体分离和纯化试剂盒



点击此处查看相关视频:MagCapture™ 外泌体提取试剂盒 PS Ver.2



产品列表
产品编号产品名称产品规格产品等级备注
294-84101MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2
MagCapture™ 外泌体提取试剂盒 PS Ver.2
2次用基因研究用
290-84103MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2
MagCapture™ 外泌体提取试剂盒 PS Ver.2
10次用基因研究用
外泌体提取纯化试剂(大规模样品用)
产品编号产品名称产品规格产品等级备注
290-80301PS Capture(TM) Exosome Isolation Resin Kit 
PS Capture™外泌体提取树脂试剂盒
1 Kit基因研究用-

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292-83801CD81-Capture Human Exosome ELISA Kit (Streptavidin HRP) 
CD81-Capture 人外泌体ELISA试剂盒(链霉亲和素HRP)
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297-79701PS Capture(TM) Exosome Flow Cytometry Kit 
PS Capture™外泌体流式试剂盒
96 tests基因研究用-
外泌体标记抗体
产品编号产品名称产品规格产品等级备注
012-27063Anti CD63, Monoclonal Antibody (3-13) 
抗CD63单抗(3-13)
100 μL免疫化学用-
014-27643Anti CD63, Monoclonal Antibody (3-13), Fluorescein Conjugated 
抗CD63,单克隆抗体(3-13),荧光素结合
100 tests免疫化学用-
019-27713Anti CD63, Monoclonal Antibody (3-13), Biotin Conjugated 
抗CD63单克隆抗体(3-13),sheng物素偶联
100 μL免疫化学用-
011-27751Anti CD63, Monoclonal Antibody (3-13), Red Fluorochrome(635) Conjugated 
抗CD63单克隆抗体(3-13),红色荧光染料(635)偶联
25 tests免疫化学用-
017-27753Anti CD63, Monoclonal Antibody (3-13), Red Fluorochrome(635) Conjugated 
抗CD63单克隆抗体(3-13),红色荧光染料(635)偶联
100 tests免疫化学用-
014-27763Anti CD9, Monoclonal Antibody (1K) 
抗CD9单克隆抗体(1K)
100 μL免疫化学用-
011-27773Anti CD81, Monoclonal Antibody (17B1) 
抗CD81单克隆抗体(17B1)
100 μL免疫化学用-
013-27951Anti CD9, Rat Monoclonal Antibody (30B) , Biotin Conjugated 
抗CD9,大鼠单克隆抗体(30B),sheng物素标记
20 μL免疫化学用-
019-27953Anti CD9, Rat Monoclonal Antibody (30B) , Biotin Conjugated 
抗CD9,大鼠单克隆抗体(30B),sheng物素标记
100 μL免疫化学用-
细胞外囊泡保存稳定剂
产品编号产品名称产品规格产品等级备注
058-09261EV-Save™ Extracellular Vesicle Blocking Reagent 
EV-Save™ 细胞外囊泡保存稳定剂(超滤用)
1 mL基因研究用-
Tim-Fc系列
产品编号产品名称产品规格产品等级备注
081-10261Human TIM4/Human Fc Chimera, recombinant 
人Tim4/人Fc嵌合体,重组
100 μg基因研究用-
137-18511Mouse TIM4/Human Fc Chimera, recombinant 
鼠标TIM4/人Fc嵌合体,重组
100 μg基因研究用-
磁力架
产品编号产品名称产品规格产品等级备注
299-36421MAGNET STAND 
MagCapture系列磁珠捕获用磁力架
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