间充质干细胞专用外泌体生产用培养基

EV-Up™ 间充质干细胞专用外泌体生产用培养基是一种间充质干细胞（MSC）专用的外泌体（EVs）生产培养基。只要将EV-Up™ 间充质干细胞外泌体生产用添加剂，无动物源成分添加至EV-Up™ 间充质干细胞外泌体生产用基础培养基，无动物源成分中配成培养基即可使用。本品不含血清及动物源成分， 适用于多种组织来源的MSCs的培养。

◆特点

●　比血清培养基的外泌体分泌量高

●　培养的外泌体活性高

●　维持MSC的高存活率

◆适用细胞

适用于多种组织来源的MSC

细胞种类

骨髓来源的MSC，脂肪来源的MSC，脐带基质来源的MSC等

◆使用方法

*1：往EV-Up™ 间充质干细胞外泌体生产用基础培养基，无动物源成分（产品编号：053-09451）中添加了EV-Up™ 间充质干细胞外泌体生产用添

*1：加剂，无动物源成分（产品编号：298-84001）即为EV-Up™ 培养基

6孔板培养

1. 将各种间充质干细胞以5×10³的密度来铺板，然后用增殖培养基（血清培养基或无血清培养基）培养至80-90%汇合。

2. 去除增殖培养基后加入4 mL EV-UP™培养基。培养3-5日。

3. 回收培养上清，2,000×g离心20分钟，用干净试管收集离心后的上清液，避免吸入沉淀。

※　可在培养上清中添加1/100的EV-Save™ 细胞外囊泡吸附抑制剂来抑制试管或吸头等对EV的吸附。

4. 用MagCapture™ 外泌体提取试剂盒PS提取培养上清中的外泌体。

◆应用数据

外泌体粒子数

利用PS亲和法^*1从各种培养基的培养上清液中提取外泌体，使用NanoSight的Nano Tracking Analysis技术对外泌体的粒子数进行分析。

*1：在金属离子的存在下，结合分子通过磷脂酰si氨酸（PS）捕获细胞外囊泡后，再使用螯合剂洗脱的方法。

*1：使用MagCapture™外泌体提取试剂盒PS时，可以通过本方法进行外泌体提取。

*2：Exosome-Depleted FBS

FUJIFILM Wako研发的EV-Up™ 培养基，在培养MSC时，释放的外泌体粒子数是D-MEM+10% EV depleted FBS培养的2.6倍左右。另外，FUJIFILM Wako的EV-Up™ 培养基与血清培养基相比，可以分泌更多的EV。

抗纤维化活性

用TGFβ刺激培养人胎肺成纤维细胞（TIG3细胞），用PS亲和法从不同培养基的培养上清中提取EV，取5×10⁷ particles/mL提取出的EV，用RT-PCR对纤维化标记物（Collagen III，αSMA）的基因表达水平进行定量，以比较抗纤维化活性。

使用FUJIFILM Wako研发的EV-Up™ 培养基的EV，强力抑制了由TGFβ引起的纤维化相关基因的表达。由此可见，FUJIFILM Wako的EV-Up™ 培养基能培养出的外泌体活性更高。

细胞存活率

将在血清培养基中扩增培养的人骨髓来源的MSC用不同培养基培养5天，然后检测产生外泌体后的细胞存活率。

FUJIFILM Wako 的EV-Up™ 培养基培养的MSC与D-MEM+10% EV-depleted FBS相比，具有同样高的细胞存活率。

外泌体标志物蛋白表达

用PS亲和法从培养上清液中提取外泌体，并通过ELISA检测标记蛋白CD9、CD63和CD81的表达。

FUJIFILM Wako的EV-Up™ 培养基与其他血清培养基相比，不同外泌体标记分子的表达更好。

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