简要描述：在血液中NEFA（Non-esterified Fatty Acid：游离脂肪酸）与白蛋白结合，被转运至外周组织，成为外周组织重要的能源来源。游离脂肪酸的浓度通过脂肪组织释放、外周组织消耗以及肝脏摄取进行调节。
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LabAssay™ NEFA
LabAssay™ you离脂肪酸检测试剂盒
在血液中NEFA（Non-esterified Fatty Acid：游离脂肪酸）与白蛋白结合，被转运至外周组织，成为外周组织重要的能源来源。游离脂肪酸的浓度通过脂肪组织释放、外周组织消耗以及肝脏摄取进行调节。
本产品采用了基于酰基fu酶A合成酶（ACS）、酰基fu酶A氧化酶（ACOD）和3-甲基-N-乙基-N-（β-羟yi基）-苯胺（MEHA）的蓝紫色显色酶法。不可用于体外诊断。
◆检测原理
样品中的游离脂肪酸（NEFA）在酰基fu酶A（Acyl-CoA）和腺苷- 5'-三磷酸二钠（ATP）存在下，通过酰基fu酶A合成酶（ACS）的作用，生成酰基fu酶A、AMP以及焦磷酸（PPi）。生成的酰基fu酶A在酰基fu酶A氧化酶（ACOD）的作用下被氧化，同时生成2,3-反式烯酰fu酶A（2,3-trans-Enoyl-CoA）和过氧化氢。生成的过氧化氢在过氧化物酶（POD）的作用下，与3-甲基-N-乙基-N-（β-羟yi基）-苯胺（MEHA）和4-氨基an替比林（4-Aminoantipyrine）进行定量氧化缩合，生成蓝紫色色素。通过测定这种蓝紫色的吸光度，即可计算样品中的NEFA浓度。
◆性能
● 标准曲线范围：0.4～1.97 mEq/L
● 检测时间：约 20 min
● 所需样品量：4 μL
● 测定波长：550 nm
● 检测对象：小鼠、大鼠、人、猫、狗
● 样品：血清、血浆、培养上清
◆试剂盒组成
１．显色剂A——10 mL用×4瓶
２．显色剂A溶解液——45 mL×1瓶
３．显色剂B——20 mL用×4瓶
４．显色剂B溶解液——90 mL×1瓶
５．标准溶液（油酸1 mEq/L）——7 mL×1瓶
５． ※ 油酸1 mEq/L=1 mmol
◆检测操作方法
微孔板法
按下表条件进行反应。
No. | 标准溶液 | 蒸馏水或去离子水 | 样品量 | 浓度 |
| 1 | 80 µL | 120 µL | 4 μL | 0.40 mEq/L |
| 2 | 120 µL | 80 µL | 4 μL | 0.60 mEq/L |
| 3 | 160 µL | 40 µL | 4 μL | 0.80 mEq/L |
| 4 | 未经稀释 | - | 4 μL | 1.00 mEq/L |
| 5 | 未经稀释 | - | 8 μL | 1.97 mEq/L*1 |
*1：样品量通常是4 μL, 但在这里使用了8 μL。NEFA的浓度需要根据上表校正。
Test | 标准 | 试剂空白 | 样品空白＊２ | |
显色试剂 A | 80 μL | 80 μL | 80 μL | 80 μL |
待测物 | 血清 4 μL | 标准溶液 4 μL | 蒸馏水或去离子水 4 µL | ― |
充分混合＊3、37 ℃加热10 min。 | ||||
显色试剂 B | 160 μL | 160 μL | 160 μL | 160 μL |
待测物 | ― | ― | ― | 血清 4 μL |
充分混合＊3、37 ℃加热10 min。 | ||||
恢复至室温，在30 min内以空白作为对照，测定样品和标准溶液的吸光度。 | ||||
550 nm 吸光过滤 | ||||
*2：普通的样品无需检测样品空白，请对乳糜血清或溶血血清样品进行样品空白检测。
*3：使用板式搅拌机，在600~1000 rpm下搅拌1 min左右。
◆加标回收测试
NEFA的加标回收测试，将已知含量的标准品加标到人、小鼠、大鼠样品中，n=2。
人样品
人样品 | 添加量（mEq/L） | 测定值（mEq/L） | 回收量（mEq/L） | 回收率（%） |
血清样品 | - | 0.69 | ||
0.4 | 1.14 | 0.45 | 111.80% | |
0.61 | 1.34 | 0.64 | 105.70% | |
0.78 | 1.54 | 0.85 | 108.50% | |
1.01 | 1.73 | 1.03 | 102.30% | |
血浆（EDTA） 样品 | - | 0.28 | ||
0.4 | 0.7 | 0.43 | 105.30% | |
0.61 | 0.9 | 0.62 | 102.50% | |
0.78 | 1.12 | 0.84 | 106.80% | |
1.01 | 1.34 | 1.06 | 105.40% |
小鼠样品
小鼠样品 | 添加量（mEq/L） | 测定值（mEq/L） | 回收量（mEq/L） | 回收率（%） |
血清样品 | - | 0.7 | ||
0.4 | 1.07 | 0.37 | 91.70% | |
0.61 | 1.31 | 0.61 | 100.10% | |
0.78 | 1.44 | 0.74 | 94.50% | |
1.01 | 1.62 | 0.92 | 91.30% | |
血浆（EDTA） 样品 | - | 0.62 | ||
0.4 | 0.99 | 0.37 | 92.50% | |
0.61 | 1.29 | 0.68 | 111.50% | |
0.78 | 1.38 | 0.77 | 97.80% | |
1.01 | 1.62 | 1 | 99.10% |
大鼠样品
大鼠样品 | 添加量（mEq/L） | 测定值（mEq/L） | 回收量（mEq/L） | 回收率（%） |
大鼠血清样品 | - | 0.57 | ||
0.4 | 1 | 0.43 | 106.40% | |
0.61 | 1.21 | 0.65 | 106.20% | |
0.78 | 1.4 | 0.83 | 106.40% | |
1.01 | 1.57 | 1.01 | 99.70% | |
大鼠血浆 （EDTA）样品 | - | 0.41 | ||
0.4 | 0.86 | 0.45 | 111.50% | |
0.61 | 1.07 | 0.66 | 108.50% | |
0.78 | 1.27 | 0.86 | 109.50% | |
1.01 | 1.44 | 1.02 | 101.40% |
培养基样品
样品 | 添加量（mEq/L） | 测定值（mEq/L） | 回收量（mEq/L） | 回收率（%） |
50%培养基 +标准品 | - | 0.03 | - | - |
0.374 | 0.409 | 0.38 | 101.60% | |
0.683 | 0.71 | 0.68 | 99.60% | |
0.829 | 0.812 | 0.782 | 94.40% | |
1.013 | 1.059 | 1.03 | 101.70% |
◆样品检测示例
人血清样品
测定值（mEq/L） | mean | SD | CV（%） | ||
混合人血清，男性 | 0.686 | 0.688 | 0.687 | 0.001 | 0.2 |
混合人血浆 （K2EDTA），男性 | 0.354 | 0.35 | ※0.352 | 0.003 | 0.8 |
※参考值
20%稀释CD-1（ICR）雄性小鼠正常血清
序号 | 测定值（mEq/L） | Mean（mEq/L） | SD | CV（%） | |
1 | 1.119 | 1.117 | 1.118 | 0.001 | 0.1 |
2 | 0.783 | 0.793 | 0.788 | 0.007 | 0.9 |
3 | 0.7 | 0.731 | 0.715 | 0.022 | 3.1 |
4 | 0.795 | 0.792 | 0.794 | 0.002 | 0.2 |
5 | 0.825 | 0.833 | 0.829 | 0.005 | 0.6 |
100%CD-1(ICR)雄性小鼠正常血浆（K2EDTA）
序号 | 测定值（mEq/L） | Mean（mEq/L） | SD | CV（%） | |
1 | 0.311 | 0.308 | ※0.309 | 0.002 | 0.6 |
2 | 0.319 | 0.321 | ※0.320 | 0.002 | 0.6 |
3 | 0.202 | 0.208 | ※0.205 | 0.004 | 2 |
4 | 0.173 | 0.185 | ※0.179 | 0.008 | 4.6 |
5 | 0.293 | 0.318 | ※0.305 | 0.017 | 5.6 |
※参考值
10％稀释雄性Sprague Dawley大鼠正常血清
序号 | 测定值（mEq/L） | Mean（mEq/L） | SD | CV（%） | |
1 | 0.3 | 0.3 | ※0.300 | 0 | 0 |
2 | 0.373 | 0.368 | ※0.371 | 0.004 | 1.1 |
3 | 0.301 | 0.277 | ※0.289 | 0.017 | 5.8 |
4 | 0.365 | 0.364 | ※0.365 | 0 | 0.1 |
5 | 0.403 | 0.362 | ※0.382 | 0.029 | 7.6 |
※参考值
100％雄性Sprague Dawley大鼠正常血浆（K2EDTA）
样品批次 | 测定值（mEq/L） | Mean | SD | CV（%） | |
RAT432145 | 0.336 | 0.33 | ※0.333 | 0.004 | 1.2 |
RAT432146 | 0.358 | 0.354 | ※0.356 | 0.003 | 0.8 |
RAT432147 | 0.311 | 0.339 | ※0.325 | 0.02 | 6 |
RAT432148 | 0.222 | 0.214 | ※0.218 | 0.005 | 2.6 |
RAT432149 | 0.522 | 0.508 | 0.515 | 0.01 | 1.9 |
※参考值
◆样品检测示例
100%雄性比格犬正常血清
序号 | 测定值（mEq/L） | Mean（mEq/L） | SD | CV（%） | 年龄 | |
1 | 0.654 | 0.657 | 0.656 | 0.0027 | 0.4 | 4 |
2 | 0.642 | 0.688 | 0.665 | 0.032 | 4.8 | 6 |
3 | 0.419 | 0.431 | 0.425 | 0.009 | 2 | 6 |
4 | 0.377 | 0.383 | ※0.38 | 0.0057 | 1.5 | 11 |
5 | 0.887 | 0.877 | 0.882 | 0.007 | 0.8 | 12 |
6 | 0.604 | 0.595 | 0.599 | 0.006 | 1.1 | 6 |
7 | 0.987 | 1.025 | 1.006 | 0.0267 | 2.7 | 10 |
8 | 0.501 | 0.51 | 0.506 | 0.006 | 1.2 | 4 |
※参考值
100%雄性比格犬正常血浆（EDTA）
序号 | 测定值（mEq/L） | Mean（mEq/L） | SD | CV（%） | 年龄 | |
1 | 0.44 | 0.444 | 0.442 | 0.0033 | 0.7 | 4 |
2 | 0.419 | 0.435 | 0.427 | 0.011 | 2.6 | 6 |
3 | 0.311 | 0.306 | ※0.308 | 0.0037 | 1.2 | 10 |
4 | 0.47 | 0.487 | 0.478 | 0.0123 | 2.6 | 12 |
5 | 0.472 | 0.475 | 0.473 | 0.005 | 1 | 6 |
6 | 0.37 | 0.364 | ※0.367 | 0.0047 | 1.2 | 11 |
7 | 0.789 | 0.77 | 0.78 | 0.0133 | 1.7 | 10 |
8 | 0.439 | 0.384 | 0.411 | 0.0387 | 9.4 | 12 |
※参考值
100% 雄性短毛猫正常血清
序号 | 测定值（mEq/L） | Mean（mEq/L） | SD | CV（%） | 年龄 | |
1 | 0.709 | 0.726 | 0.717 | 0.0117 | 1.6 | 3 |
2 | 0.628 | 0.642 | 0.635 | 0.01 | 1.6 | 3 |
3 | 1.004 | 1.003 | 1.004 | 0.0053 | 0.5 | 6 |
4 | 0.974 | 0.987 | 0.981 | 0.0093 | 0.9 | 4 |
5 | 0.624 | 0.649 | 0.636 | 0.017 | 2.7 | 6 |
6 | 1.175 | 1.212 | 1.193 | 0.0267 | 2.3 | 6 |
7 | 1.086 | 0.959 | 1.022 | 0.0893 | 8.8 | 1 |
8 | 0.371 | 0.393 | ※0.382 | 0.0157 | 4.1 | 1 |
※参考值
100％雄性短毛猫正常血浆（EDTA）
序号 | 测定值（mEq/L） | Mean（mEq/L） | SD | CV（%） | 年龄 | |
1 | 1.092 | 1.107 | 1.099 | 0.0103 | 0.9 | 0.5 |
2 | 0.177 | 0.172 | ※0.174 | 0.0033 | 2 | 1 |
3 | 0.243 | 0.24 | ※0.241 | 0.0043 | 1.7 | 3 |
4 | 0.32 | 0.319 | ※0.320 | 0.0067 | 2.2 | 0.5 |
5 | 0.363 | 0.354 | ※0.359 | 0.006 | 1.7 | 3 |
6 | 0.206 | 0.189 | ※0.197 | 0.012 | 6.2 | 3 |
7 | 0.232 | 0.199 | ※0.215 | 0.024 | 11.1 | 0.5 |
8 | 0.142 | 0.12 | ※0.131 | 0.016 | 12.3 | 1 |
※参考值
◆稀释线性度测试
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| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
| 299-94301 | LabAssay™ NEFA LabAssay™ you离脂肪酸检测试剂盒 | 500 tests | - | - |
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