简要描述：残留DNA提qu试剂盒遵照中国药典记载的碘化na法，适用于疫苗和治疗用生物制品所含宿主细胞残余DNA的提取。残留DNA提qu试剂盒可以提取样品中含有的极微量的DNA，回收率较高。DNA的提取操作时间为60-90 min。提取的DNA可以通过qPCR进行定量。
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生物制药残留DNA提qu试剂盒（碘化na法）
残留DNA提qu试剂盒遵照中国药典记载的碘化na法，适用于疫苗和治疗用生物制品所含宿主细胞残余DNA的提取。
残留DNA提qu试剂盒可以提取样品中含有的极微量的DNA，回收率较高。DNA的提取操作时间为60-90 min。提取的DNA可以通过qPCR进行定量。
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◆特点
● 高回收率回收微量DNA（100-1,000 fg）
● 无需更换试管（全程仅使用1根试管）
● 整个提取过程仅需60-90 min
● 提供高浓度蛋白样品的前处理实验方案
● 回收后的DNA可通过qPCR、Threshold Assay(Molecular Devices)进行定量
● 采用碘化na法
◆原理
1. 使样品中的蛋白质和脂质溶于碘化na和月桂酰肌氨酸钠；
2. 异丙醇与糖原选择性地共沉淀DNA。
◆标准步骤
◆应用实例
DNA spiking test（加标回收实验）
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DNA Extractor™ Kit可以高产量提取残留DNA，甚至少量残留DNA。
◆抗体药物适用性研究
从高蛋白溶液中提取DNA
使用不同浓度的IgG溶液检测CHO来源DNA的加标回收率。
方法
1） 向不同浓度的IgG溶液(10-100 mg/mL)中添加2 pg/mL CHO来源DNA。
2） 按照本产品说明书记载的实验方案提取DNA。
● 提取实验方案：Protocol#2
● 样品前处理：蛋白浓度超过2 mg/mL时实施的前处理方案（Proteinase K处理）
3） 通过qPCR法计算提取的CHO来源DNA的回收率。
结果
不同蛋白浓度溶液的Cq值
Sample | Input | 蛋白浓度 (mg/mL) | |||||
10 | 20 | 40 | 60 | 80 | 100 | ||
Cq | 31.596 | 31.566 | 31.351 | 31.726 | 31.502 | 31.282 | 31.658 |
31.599 | 31.608 | 31.774 | 31.787 | － | 31.485 | 31.66 | |
31.338 | 31.861 | 31.5 | 31.85 | 31.56 | 31.369 | － | |
Average Cq | 31.511 | 31.678 | 31.542 | 31.788 | 31.531 | 31.379 | 31.659 |
Difference of Cq | 0 | -0.167 | 0.136 | -0.246 | 0.257 | 0.152 | -0.28 |
Power | 1 | 0.891 | 1.099 | 0.843 | 1.195 | 1.111 | 0.824 |
Recovery Rate (%) | 100 | 89.1 | 109.9 | 84.3 | 119.5 | 111.1 | 82.4 |
不同蛋白浓度溶液的CHO来源DNA回收率
结果显示，即使蛋白浓度高达100 mg/mL，也能高回收率提取CHO来源DNA。
从抗体药物模拟溶液中提取 DNA
检测抗体药物常用的Buffer及添加剂制备的IgG溶液中的 CHO来源DNA的加标回收率。
方法
1） 向抗体药物中常用的Buffer组成（表1.①-⑥）及添加剂溶液中添加20 mg/mL的IgG蛋白，制备不同的抗体药物模拟溶液。向不同溶液中添加
1） 20 pg/mL CHO来源DNA。
2） 根据本产品说明书记载的实验方案提取DNA。
● 提取实验方案：Protocol#2
● 样品前处理：蛋白浓度超过2 mg/mL时实施的前处理方案（Proteinase K处理）
3） 通过qPCR法计算提取的CHO来源DNA的回收率。
表1 Buffer组成
No. | Buffer组成 |
① | 10 mM PB pH 6.0, 0.15 M NaCl, 2 mM EDTA |
② | 10 mM PB pH 7.4, 0.15 M NaCl, 2 mM EDTA |
③ | 50 mM NaOAc pH 5.2, 0.15 M NaCl, 2 mM EDTA |
④ | 10 mM PB pH 6.0, 2 mM EDTA |
⑤ | 10 mM PB pH 7.4, 2 mM EDTA |
⑥ | 50 mM NaOAc pH 5.2, 2 mM EDTA |
表2 添加剂溶液
Buffer: 10 mM PB pH 6.0, 0.15 M NaCl, 2 mM EDTA
No. | 添加剂（浓度） |
① | Sucrose (10 w/v%) |
② | Trehalose Dihydrate (10 w/v%) |
③ | D(-)-Mannitol (10 w/v%) |
④ | D(-)-Sorbitol (10 w/v%) |
⑤ | D(+)-Maltose Monohydrate (10 w/v%) |
⑥ | L(+)-Arginine Hydrochloride (1 w/v%) |
⑦ | L‐Histidine (1 w/v%) |
⑧ | Glycine (1 w/v%) |
⑨ | Polyoxyethylene(20) Sorbitan Monooleate (Tween80) (0.5 v/v%) |
⑩ | Polyoxyethylene(20) Sorbitan Monolaurate (Tween20) (0.5 v/v%) |
结果
不同Buffer的Cq值
| Sample | Input | Buffer | |||||
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | ||
| Cq | 31.473 | 31.693 | 31.544 | 31.218 | 31.058 | 31.595 | 31.181 |
| 31.364 | 31.196 | 30.973 | 31.568 | 31.085 | 31.343 | 31.112 | |
| 31.045 | 31.53 | 31.787 | 31.315 | 30.942 | 31.452 | 31.558 | |
| Average Cq | 31.294 | 31.473 | 31.435 | 31.367 | 31.028 | 31.463 | 31.284 |
| Difference of Cq | 0 | -0.179 | -0.141 | -0.073 | 0.266 | -0.169 | 0.01 |
| Power | 1 | 0.883 | 0.907 | 0.951 | 1.203 | 0.89 | 1.007 |
| Recovery Rate (%) | 100 | 88.3 | 90.7 | 95.1 | 120.3 | 89 | 100.7 |
不同Buffer的CHO来源DNA回收率
不同添加剂溶液的Cq值
Sample | Input | 添加剂溶液 | |||||||||
① | ② | ③ | ④ | ⑤ | ⑥ | ⑦ | ⑧ | ⑨ | ⑩ | ||
Cq | 31.473 | 31.826 | 31.327 | 30.907 | 31.143 | 31.071 | 31.525 | － | 31.525 | 31.013 | 31.086 |
31.364 | 31.194 | 30.991 | 31.759 | 31.103 | 31.279 | 31.068 | 31.442 | 31.203 | 31.34 | 30.87 | |
31.045 | 30.703 | － | 31.009 | － | 30.978 | 31.225 | 31.479 | 30.757 | 31.02 | 31.02 | |
Average Cq | 31.294 | 31.241 | 31.159 | 31.225 | 31.123 | 31.109 | 31.273 | 31.461 | 31.162 | 31.124 | 30.992 |
Difference of Cq | 0 | 0.053 | 0.135 | 0.069 | 0.171 | 0.185 | 0.021 | -0.167 | 0.132 | 0.17 | 0.302 |
Power | 1 | 1.037 | 1.098 | 1.049 | 1.126 | 1.137 | 1.015 | 0.891 | 1.096 | 1.125 | 1.233 |
Recovery Rate (%) | 100 | 103.7 | 109.8 | 104.9 | 112.6 | 113.7 | 101.5 | 89.1 | 109.6 | 112.5 | 123.3 |
不同添加物溶液的CHO来源DNA回收率
结果显示，即使含有不同Buffer组成和添加剂的IgG溶液也能高回收率提取CHO来源DNA。
◆试剂盒构成
产品编号 | 内容物 | 内容量 |
299-81111 | 碘化na溶液, CP | 26 mL |
296-81121 | 月桂酰肌氨酸钠, CP | 1.2 mL |
293-81131 | 洗净液A, CP | 42 mL |
290-81141 | 洗净液B, CP | 40 mL×2 |
297-81151 | 糖原溶液, CP | 0.1 mL |
备注：每种成分不单独出售
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| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
| 292-81101 | 残留DNA提qu试剂盒（碘化na法） DNA Extractor™ Kit for Residual DNA, CP Method (Sodium Iodide Method) | 50 tests | - | - |
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
| 290-85301 | QCdetect(TM) Residual DNA Detection Kit for E. coli QCdetect™ 残留DNA检测试剂盒，大肠杆菌用 | 100 tests | - | - |
| 294-85201 | QCdetect(TM) Residual DNA Detection Kit for CHO cells QCdetect™ 残留DNA检测试剂盒，CHO细胞用 | 100 tests | - | - |
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