CLARITY相关试剂

CLARITY相关试剂

“CLARITY"作为新型的组织透明化技术，由斯坦福大学的Dr. Karl Deisseroth等发表于2013年3月的Nature杂志。由于CLARITY可用于荧光蛋白和抗体的免疫染色，有望用作分析大脑神经回路的有效工具。

此外，“PACT（被动CLARITY技术，passive clarity technique）"在2014年发表，通过去除双丙烯酰胺和增加表面活性剂的浓度，无需电泳即可实现被动性的组织透明化。

FUJIFILM Wako可提供文献中实验方案中透明化步骤使用的试剂，如VA-044等试剂。

参考文献

1） Chung,K et al. : Nature., 497, 332(2013).

2） Yang, B. et al., : Cell, 158(4), 945(2014).

◆CLARITY实验方案示例

 ● 水凝胶单体溶液组成（Hydrogel Monomer Solution）

・VA-044・・・・・・・・・・・ 1 g

・40% 丙烯酰胺 ・・・・・40 mL

・2% 双丙烯酰胺・・・・10 mL

・10 × PBS ・・・・・・・・・・40 mL

・16% 多聚甲醛・・ 100 mL

・皂苷・・・・・・・・・・・200 mg

・水・・・・・・・・・・・・・・210 mL

● 电泳buffer组成

・硼酸・・・123.66 g

・SDS・・・・400 g

・NaOH ・・・调至pH 8.5

・水・・・・・最多可加入10 L

● 脂质除去用电泳槽

・Electrophoresis Chamber For Lipid Extraction（NIHON EIDO）

● 循环泵

・GPU-1、GPU-2（Azscience）

◆PACT 实验方案示例

● A4P0组成

· VA-044・・・・・・・・・・・0.25%

· 丙烯酰胺 ・・・・・4%

· 含有上述成分的PBS溶液

● RIMS组成（RI 1.46）

· tween 20・・・0.1%

· die氮化钠・・・・0.01%

· 含有上述成分的0.02 M PBS・・・30 mL

· dian海醇・・・40 g

· NaOH ・・・调整至pH7.5

◆应用数据

经CLARITY处理的小鼠大脑

经CLARITY处理的小鼠大脑成像

图2.  经CLARITY处理的Thy1-YFP（H Line）小鼠大脑的荧光观察

（A）从大脑皮层到海马体的３D观察图像；（B）大脑皮层Ⅴ层锥体细胞的树突图像

拍摄条件：双光子；使用设备：Olympus FV1000正置显微镜，25倍浸没物镜

CLARITY处理+使用抗体的小鼠大脑成像

图3. 经CLARITY处理后，使用Iba1抗体染色的Thy1-YFP（Ｈ线）小鼠大脑的荧光观察

（A）在大脑皮层的小胶质细胞３D观察图像；（B）从表层观察皮质层Ⅰ的图像

拍摄条件：单光子；使用设备：Olympus FV1000正置显微镜，25倍浸没物镜

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