简要描述：CYTO-ID® Autophagy Detection Kit 使用新型染料检测自噬小泡和监控活细胞自噬流，选择性标记积累的自噬小泡。染料已通过优化，不染溶酶体，在自噬前体、自噬体和自噬溶酶体里呈现出明亮的荧光。该试剂盒提供了一种无需细胞转染，可以在活细胞中监控细胞自噬的快速定量方法。
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| 品牌 | 其他品牌 | 供货周期 | 一个月 |
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CYTO-ID® 自噬检测试剂盒
CYTO-ID® Autophagy Detection Kit 使用新型染料检测自噬小泡和监控活细胞自噬流，选择性标记积累的自噬小泡。染料已通过优化，不染溶酶体，在自噬前体、自噬体和自噬溶酶体里呈现出明亮的荧光。该试剂盒提供了一种无需细胞转染，可以在活细胞中监控细胞自噬的快速定量方法。 |
CYTO-ID® Autophagy Detection Kit |
◆特点
● 无需转染，定量监测活细胞中的自噬情况
● 免去 LC3-GFP 转染所需的时间和精力以及转染效率的验证
● 含有特殊基团的染料选择性地染色自噬小泡
● 试剂盒中包含已知活性的自噬抑制剂与激活剂
● 快速量化原生异质性细胞群中的自噬
● 选择性地染色，可检测和区分自噬流（autophagic flux）和自噬溶酶体的积累
● 不染溶酶体，减少其他染料的背景干扰
● 便于高通量筛选自噬激活剂和抑制剂
◆原理
该产品所用探针是阳离子两亲性示踪剂（CAT）染料，以类似诱导磷脂药物的方式迅速进入到细胞中。染料的功能基团能够选择性标记与自噬通路相关的小泡，而不会在溶酶体中聚集。
胞内物质被扩大的膜囊包裹，吞噬泡形成双层膜囊泡，成为自噬体。自噬体外膜随后与溶酶体融合，和内部物质被自噬性溶酶体降解。自噬的各种调节因子也被描绘于图中。 |
自噬原理图 |
◆应用
省时省力，无需转染即可自快速全面的标记自噬小泡 为了演示 CYTO-ID® Green detection reagent 的优势，先用 RFP-LC3 表达载体转染 HeLa 细胞，10 μM 的 Tamoxifen 处理过夜，然后用 CYTO-ID® 绿色检测试剂染色。LC3 转染法需要过夜，而 CYTO-ID® 绿色检测试剂的方法在15-30分钟内标记细胞达100％。图A：绿信号显示自噬小泡的 CYTO-ID® 绿染;图B：成功转染细胞的 RFP-LC3 表达（红色）；图C：自噬体的特异性标记 LC3，与 CYTO-ID® 绿色染料标记的小泡共定位的复合图像。 | 的发放 |
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无转染的自噬检测 Hela细胞进行饥饿与恢复，然后使用 CYTO-ID® Green detection reagent 标记。染料可以明确检测和量化自噬及与自噬诱导相关的自噬小泡前体。图1A：稳定表达 GFP-LC3 的CHO细胞，结果显示对照组与饥饿的细胞群的相对较差的基线分离，自噬难以量化。图1B：CYTO-ID® Autophagy Detection Kit 特异性标记 LC3 蛋白依赖的自噬小泡，免去转染操作。 |
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自噬积累和自噬流的可视化 可用荧光显微镜观察CYTO-ID® 自噬绿色染料检测的自噬液泡积累和自噬流。Hela细胞用以下试剂进行模拟诱导，0.2% DMSO（A）和100 μM Clonidine hydrochloride（B）进行诱导，5 μM Loperamide hydrochloride 和 1 μM PP242 hydrate（D）在37°C诱导12小时。处理后，细胞在37℃下用CYTO-ID® Green Detection reagent 孵育10分钟，再用分析缓冲液清洗。细胞核被 Hoechst 33342 染料复染为蓝色。 |
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避免非特异性溶酶体染色的背景干扰 相比其他 MDC 染色溶酶体检测，CYTO-ID® 绿色染料无溶酶体染色背景，CYTO-ID® Autophagy kit 无需紫外活细胞分析，在显微镜共标记应用中，与 Hoechst 染料兼容。 |
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使用流式细胞仪通过 CYTO-ID® Autophagy Detection Kit 分析自噬 对照组（红线峰值）无诱导，10 uM Tamoxifen（ALX-550-095）处理 Jurkat 细胞（白血病T细胞）（蓝线峰值）。处理18小时后，细胞结合 CYTO-ID® 绿色检测试剂，然后不经过流式细胞仪清洗，进行分析。结果通过直方图呈现。对照组细胞被染色，但荧光亮度低。实验组中，CYTO-ID® 绿色荧光信号增加约２倍，表明 Tamoxifen 处理能引起 Jurkat 细胞中自噬的增加。 |
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使用 mTOR 激酶抑制剂 Rapamycin 处理 HepG2 细胞孵育过夜，结果显示 CYTO-ID® 染色信号升高。 |
CYTO-ID® 绿色染料大多与 RFP-LC3蛋白共定位。0.1 μM Rapamycin（典型自噬诱导剂）处理过夜，转染 Hela 细胞表达RFP-LC3。 A: CYTO-ID® Green 染色； B: RFP-LC3； C: 合成图像。 |
CYTO-ID® 自噬检测试剂盒 2.0
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产品编号 | 产品名称 | 规格 | 备注 | 应用 |
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ENZ-51035-K100 | 100 tests |
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
| ENZ-51031-K200 | Cyto-ID® Autophagy detection kit CYTO-ID®自噬检测试剂盒 | 200 tests | - | - |
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