细胞培养的知识总结

　　每一个实验新手们刚进实验室操作细胞，都是紧张兴奋又手忙脚乱，就从最基本的养细胞来说，大家刚开始一定觉得理论知识看起来很容易，但是，在实际情况中一般是这样的——“到底怎么回事，细胞长不好/细胞又死了/又污染了......"

　　这时，如果有一份靠谱的细胞培养经验总结，或许可以帮助你少走弯路，今天就为大家分享一下由我们实验室总结的细胞培养过程中的知识总结，让你事半功倍。

　　首先，我们来看看，什么是细胞培养：

　　细胞培养是指细胞在体外的培养技术，即在无菌条件下，从机体中取出组织或细胞，模拟机体内正常生理状态下生存的基本条件，让它在培养皿中继续生存、生长和繁殖的方法。通过细胞培养我们可以获得大量的、性状相同的细胞，以便于研究细胞的形态结构、化学组成及功能和机制。

　　细胞真的很脆弱，就像小婴儿一样，需要你无微不至的关怀。

　　培养细胞之前，你需要做好这些准备：

　　1、耗材的处理、

　　玻璃器皿的清洗，对于玻璃器皿(细胞瓶、装营养液的瓶子、小青霉素瓶等)要用洗衣粉刷干净(注意死角)，然后冲干净。用酸液浸泡24 h以上，之后用清水冲洗数遍，除去残留酸液。瓶子之类，冲洗过程要使劲摇晃。

　　2、试剂的配置

　　试剂配置，细胞培养用的液体一般使用双蒸以上的水即可。并注意pH值的调节。

　　3、无菌检验

　　无菌检验，主要采用过滤除菌：如胰酶、抗生素、G-418溶液、各类培养基、丙酮酸钠、谷氨酰胺等。有些可以采用高压灭菌：如PBS、D-Hank's等。

　　不同细胞对培养基的要求是不同的，要根据自己的细胞要求使用。

　　细胞培养中最重要的步骤——无菌操作

　　实验进行前，超净台以紫外灯照射30分钟灭菌，以70%ethanol擦拭无菌操作台面，并开启超净工作台风扇运转数分钟后，才开始实验操作。

　　每次操作只处理一株细胞株，避免细胞间交叉污染。

　　实验完毕后，将实验物品带出工作台，再次以70%ethanol擦拭无菌操作台面。实验用品以70%乙醇擦拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在中央无菌区域，一般不要再边缘区域操作。

　　细胞培养后期——定期观察

　　你最好做到每天都去探望探望它们，看看他们的成长情况

　　1、检查培养液颜色与透明度的变化，颜色变黄，说明PH值下降;变红或紫红色，说明PH值上升，细胞生长停滞、死亡，一般生长稳定的细胞2-3天换液一次，生长缓慢的细胞可3-4天换液一次。

　　2、观察细胞生长状态，细胞长满瓶底的80%，应及时传代。

　　3、观察细胞形态变化，细胞透明度大、折光性强、轮廓清晰为佳。

　　4、注意微生物污染，常常出现培养液混浊，液体内漂菌丝或细胞菌，不仅仅指微生物，包括所有混入培养环境中的细胞生存有害的成分和造成细胞不纯的异物及细胞。

　　细胞培养之——污染筛查

　　你培养的细胞被污染了，无非是下面几个污染途径：

　　1、空气是微生物传播的最主要途径，操作时尽量避免说话、咳嗽、打喷嚏;

　　2、使用的培养器械及器皿清洗消毒不干净;

　　3、培养两种以上细胞时，操作不规范，可能导致细胞交叉污染;

　　4、血清有问题，可能血清在生产时就已经被支原体或病毒污染;

　　5、原代培养的污染多数来源于组织样本。